Western Blot

Temario

1 Western Blot: Generalidades

1.1 Historia

1.2 Ventajas y desventajas

1.3 Etapas

2. Preparación de las muestras

2.1 Métodos físicos para la dirupción de muestras

2.2 Soluciones Tampón y detergentes, según el tipo de pro-teína de interés y la localización subcelular

2.3 Inhibidores de fosfatasas y proteasas

3. Electroforesis en gel de Poliacrilamida

3.1 Medición de proteína total

3.2 Métodos físicos para la dirupción de muestras

3.3 Elección de un ensayo de proteínas

3.4 Tampón de carga de muestras

3.5 Gel de Electroforesis

3.6 Elección del grosor del gel y del tamaño de poro

3.7 Elaboración del gel

3.8 Diseño Experimental; Controles y Estándares

3.9 Controles de carga

3.10 Péptidos de bloqueo

3.11 Inicio de Electroforesis

4. Transferencia Electroforética

4.1 Transferencia a una Membrana

4.2 Bloqueo

5. Hibridación Anticuerpos

5.1 Anticuerpos Policlonales vs Monoclonales.

5.2 Incubación de los anticuerpos

6. Detección

6.1 Métodos de detección.

6.2 Ventajas e Inconvenientes de los métodos de detec-ción

6.3 Re-utilización de la membrana

7. Solución de Problemas

8. Herramientas y Referencias Técnicas

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