Viabilidad y Toxicidad Celular

Temario

Día 1: Introducción a los Ensayos de Viabilidad y Citotoxicidad Celular (09 Junio 2025: 2 h)

Sesión 1: Fundamentos de los Ensayos de Viabilidad y Citotoxicidad

• Definición y objetivos de los ensayos de viabilidad y citotoxicidad celular

• Importancia en la investigación biomédica y farmacológica

• Principales tipos de ensayos y su aplicación en estudios celulares

Sesión 2: Introducción a las Técnicas de Evaluación

• Tipos de ensayos de viabilidad: principios y comparativa

• Revisión de reactivos y equipos necesarios

Actividad Práctica: Análisis de casos de estudio y discusión de ejemplos de aplicación.

Día 2: Optimización de Ensayos de Viabilidad Celular (10 Junio 2025: 2 h)

Sesión 1: Estrategias para la Optimización de Ensayos de Viabilidad

• Factores que afectan la reproducibilidad y precisión de los ensayos

• Controles positivos y negativos en los experimentos

Sesión 2: Ensayos de Evaluación de Proliferación Celular

• 2.1 Incorporación de bromodesoxiuridina (BrdU)

• 2.2 Incorporación de 3H-timidina: metodología y análisis

• 2.3 Tinción con yoduro de propidio (PI): uso y consideraciones

• 2.4 Marcaje con proteínas de proliferación celular (Ki-67, PCNA)

• 2.5 Uso de la citometría de flujo para estudios de viabilidad y proliferación

Actividad Práctica: Simulación de análisis de datos y creación de protocolos personalizados.

Día 3: Optimización de Ensayos de Toxicidad Celular y Evaluaciones Complementarias (11 Junio 2025: 3 h)

Sesión 1: Ensayos de Evaluación de Toxicidad Celular

• Evaluación de la actividad metabólica: métodos (MTT, XTT, resazurina)

• Graficación estadística de resultados

  • Determinación de DL50 (dosis letal 50)

• Ensayos de morfología celular: identificación de cambios estructurales

Sesión 2: Evaluación de la Integridad de Membrana Celular

• Métodos para la detección de alteraciones en filamentos de actina

• Ensayos de integridad de membrana y permeabilidad

Sesión 3: Evaluación de Lesión Celular

• Tipos de alteraciones nucleares: cariolisis, picnosis y cariorrexis

Actividad Práctica: Interpretación de resultados y resolución de problemas comunes en la evaluación de toxicidad.

Día 4: Ensayos de Muerte Celular y Resolución de Problemas (12 Junio 2025: 3 h)

Sesión 1: Optimización de Ensayos de Muerte Celular

• Apoptosis: marcadores y técnicas (anexina V, caspasas)

• Necrosis: detección y distinción de apoptosis

• Autofagia: identificación mediante tinciones específicas y ensayos de LC3

Sesión 2: Evaluación de Ensayos de Migración Celular

• Técnicas de ensayo de migración: cámaras de Boyden, ensayos de herida

Sesión 3: Solución de Problemas y Dudas Comunes

• Resolución de problemas técnicos en ensayos de viabilidad y citotoxicidad

• Discusión y análisis de dudas de los participantes

Sesión de Cierre: Resumen de los puntos clave del curso y recomendaciones para la implementación práctica de los ensayos.

Actividad Final: Mesa redonda para discutir posibles conflictos y estrategias de mejora en los ensayos de viabilidad y citotoxicidad.