Knock-Out de Precisión con CRISPR-Cas9

Temario y horarios

Día 1 – 28/08/25 | 10:30 – 13:00 

Módulo 1.

1. Bienvenida y directrices del curso 

1.1 Presentación del curso: objetivos generales y alcance.
1.2 Metodología de enseñanza, estructura de las sesiones y recursos de apoyo.
1.3 Lineamientos de participación, evaluación y entrega de constancias.

2. Generalidades de CRISPR-Cas  

2.1 Historia de CRISPR-Cas y su función como sistema inmune en bacterias.
2.2 Mecanismo de acción.
2.3 Clases y subtipos de CRISPR, familias Cas y aplicaciones actuales.

Día 2 – 29/08/25 | 11:00 – 13:00 

Módulo 2. 

3. CRISPR-Cas9 como estrategia para ensayos de Knock-Out (KO) 

3.1 Elección de la secuencia del gen o genes a editar.
3.2 Diseño de ARN guía y de cebadores (sesión práctica).
3.3 Mecanismo de acción en células eucariontes e importancia de la secuencia PAM.
3.4 Relevancia de las mutaciones para obtener un KO exitoso.

Día 3 – 30/08/25 | 11:00 – 13:30 

Módulo 3.

4. Protocolo para ensayos de Knock-Out mediante CRISPR-Cas9 

4.1 Transformación vs. transfección vs. transducción.
4.2 Uso de plásmidos como vehículos.
4.3 Transformación de bacterias y programación del plásmido.
4.4 Verificación mediante PCR y secuenciación.
4.5 Transfección celular.
4.6 Selección por microscopía de fluorescencia y comprobación mediante western blot y secuenciación.
4.7 Alternativas de transfección: transducción y uso de partículas lentivirales.
4.8 Selección por puromicina y comprobación por western blot y secuenciación.

5. Cierre del curso e indicaciones finales 

5.1 Recapitulación de conceptos clave y discusión final.
5.2 Resolución de dudas frecuentes y recomendaciones para la aplicación práctica.
5.3 Evaluación de conocimientos y retroalimentación.
5.4 Indicaciones de entrega de constancias.